UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
BACTERIOLOGÍA MÉDICA
LABORATORIO
Práctica 8
“Bacterias de Enfermedades Respiratorias”
M.A. Ma. Olga González Rangel
Rebeca Salazar Sibaja # 192928
15-Octubre-2007
RESUMEN.
Se analizó la muestra obtenida de un exudado faríngeo de una paciente de 2 años. La muestra se inoculo en 3 medios diferentes: Agar Sangre, Agar Sal Manitol y Agar MacConkey. Al único agar que presentó crecimiento se le realizaron pruebas bioquímicas, macro y microscópicas. Realizada la tinción se llevo a cabo la prueba de catalasa, optoquina, nitratos, ureasa y bilis.
Concluidas las pruebas bioquímicas se identificó al microorganismo Streptococo no pneumoniae.
OBJETIVO.
Aprender a realizar un exudado faríngeo, y en base a los procedimientos de un laboratorio de microbiología, identificar al microorganismo causante de la posible infección.
INTRODUCCIÓN
En la naturaleza existen al menos 500 000 especies microbianas, tal vez mas. Solamente unos cuantos de especies son catalogados como patógenos humanos. La mayor parte de ellos llevan funciones esenciales en la vida de otras microorganismos, muchos de ellos estableciendo fuertes y estables relaciones de beneficio mutuo con plantas y animales. Sin embargo, las especies patógenas tienen efectos terriblemente negativos en los organismos hospederos.
El aire no es un medio apropiado para el crecimiento de los microorganismos: los organismos que se encuentran en el aire provienen del suelo, agua, plantas y animales, personas u otras fuentes. Los humanos alrededor de nuestras vidas respiramos 500 millones de litros de aire diarios, el cual contiene gran cantidad de infecciones respiratorias. Para identificar la fuente de un problema es necesario realizar estudios como exudados nasofaríngeos o faríngeos. Los cuales se realizan de la siguiente manera:
EXUDADO NASOFARINGEO.
Toma: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia atrás. Se introduce un hisopo de alginato de calcio, dacrón o nylon (nunca de algodón en caso de sospechar Bordetella) por las fosas nasales hasta la nasofaringe, sin tocar los cornetes y tratando de producir un acceso de tos. El hisopo se mantiene in situ de 10-15 segundos durante el acceso de tos, después de lo cual se retira rápidamente.
Envío: Si la muestra no se va a procesar de inmediato, el hisopo se mantiene en un medio de transporte y se envía de inmediato con refrigerante:
Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con 0.5mL de solución salina isotónica estéril. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente.
Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente.
EXUDADO FARINGEO
Toma: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia atrás. Se ilumina bien la cavidad orofaríngea y con un abatelenguas se empuja la lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un hisopo de algodón se hace un raspado de las áreas hiperémicas, purulentas o necróticas, así como de las membranas o manchas de Koplic, si es que las presenta.
Envío: Si la muestra no se va a procesar de inmediato, el hisopo se mantiene en un medio de transporte y se envía de inmediato con refrigerante:
Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con 1 a 2mL de solución salina isotónica estéril. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente.
Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente
Frecuentemente mandamos tomar cultivos cuando existe la sospecha de una infección, cuando nosotros tomamos un cultivo lo que hacemos es "capturar" a algunas bacterias, permitir que se reproduzcan en un medio de cultivo adecuado y luego las identificamos para saber de que especie se tratan, por ello los cultivos generalmente darán como resultado el desarrollo de bacterias que podrán ser identificadas como "flora normal" o patógenos nocivos. Ciertamente existen líquidos o compartimientos del cuerpo que son normalmente estériles y donde no habrá desarrollo de bacterias, ya que de existir representan "enfermedad" o contaminación de la muestra.
BACTERIAS Piel Conjuntiva Nariz Faringe Boca Intestino Grueso Uretra Vagina
Staphylococcus aureus + +/- + + + ++ +/- +
Streptococcus pneumoniae +/- +/- + + +/-
Streptococcus pyogenes +/- +/- + + +/- +
MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR.
Las vías respiratorias altas se extienden desde los orificios nasales hacia la laringe y comprende la nasofaringe y la orofaringe, los senos paranasales, trompa de Eustaquio y el oído medio. Las infecciones del tracto respiratorio superior más frecuentes son: laringitis, faringitis, epiglotitis, sinusitis, otitis externa y media, difteria, tos ferina, angina de Vincent y candidiasis oral. Es fundamental conocer la flora comensal para la interpretación de los resultados de laboratorio.
Flora normal del tracto respiratorio superior
Streptococcus spp (alfa, beta, no hemolíticos)
Veillonella spp.
Neisseria spp.
Peptostreptococcus spp
Actynomyces spp.
Haemophilus spp
Corynebacterium spp.
Mycoplasma spp.
Staphylococcus spp
Bacteroides spp.
Micrococcus spp.
Fusobacterium spp.
Candida spp.
Streptococcus pyogenes.- Estreptococo beta hemolítico del grupo A (EGA) es una bacteria muy prevalente en faringoamigdalitis aguda, especialmente en niños en edad escolar y adolescentes, que es capaz de causar (aunque excepcionalmente) complicaciones no supurativas graves (fiebre reumática y glomerulonefritis especialmente). Con bastante frecuencia además de faringoamigdalitis puede cursar con escarlatina y con menor frecuencia el EGA causa infecciones dérmicas (erisipela, impétigo, celulitis perianal, infección de heridas quirúrgicas, sobré infección de varicela,...) que excepcionalmente pueden cursar con miositis o con fascitis necrotizante. La transmisión del EGA es por contacto directo con personas infectadas que en general tienen faringitis. Pueden darse brotes en ambientes de hacinamiento o en guarderías y excepcionalmente pueden ser transmitidos por los alimentos.
Streptococcus pneumoniae.- Causa más frecuente de otitis media, de bacteriemia (muchas veces sin foco –bacteriemia oculta-) y de neumonía adquirida en la comunidad (al menos en los mayores de 5 años) y también es frecuente en sinusitis y conjuntivitis. Se conocen 90 serotipos distintos de Neumococo, en base al polisacárido de su cápsula, por tanto las posibilidades de reinfección por neumococo son muy numerosas, al ser independiente la inmunidad que produce cada serotipo. Los serotipos asociados a infecciones graves en pediatría de todas formas no pasan de ser alrededor de una decena. Los neumococos tienen como reservorio el ser humano y causan con frecuencia infección asintomático (estado de portador) del tracto respiratorio superior, que es especialmente frecuente en la edad pediátrica (mayor en los niños más pequeños, sobre todo si acuden a guarderías) y en las épocas frías del año. El contagio se produce por contacto persona a persona a través de gotitas respiratorias, manos y objetos compartidos y es especialmente eficaz en las guarderías.
Staphylococcus aureus.- Estafilococo más virulento. Se encuentra en todo el mundo (ubicuitaria). Es poblador habitual de la piel las mucosas, pero también se encuentra en alimentos y aguas.
Cultivo. Fácil. Crecen bien en agar y caldo, pero se usan medios selectivos y diferenciales (ágar 110, ágar manitol-sal). Estos medios llevan un 5-10 % de sal que impide el crecimiento de otras bacterias. También se usa el ágar-chapman, ágar TPEY, ágar Baird-Pancer.
Diagnóstico. Mediante el fagotipado (con cepas humanas) o bien el biotipado. Produce septicemias, y también infecciones locales (junto a pseudomonas) en heridas, dermatitis y forúnculos. En animales produce mamitis, y en los corderos piemia (una septicemia de las primeras semanas de vida). Las cepas que producen enterotoxinas también pueden provocar intoxicaciones alimentarías.
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MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIAL
Gradilla
Bata para laboratorio
Asa de nicromio recta y circular
Marcador(sharpie)
Mechero
Cubre boca
Guantes desechables
Incubadora
Encendedor
Franela
Desinfectante para la mesa de trabajo
Microscopio óptico
Portaobjetos
Aceite de inmersión
Solución salina fisiológica
Tinción de Gram.- Cristal violeta, Yodo lugol, Alcohol acetona y Safranina
Agares para inocular: Agar Sangre, Agar Sal Manitol y Agar Mackonkey
Exudado faríngeo
MÉTODOS
Instruir al paciente de que la toma de muestra debe ser en completo ayuno y sin aseo bucal. Con un abate lenguas estéril, exponer los órganos orofaringeos y con un hisopo estéril raspar ligeramente las amígdalas, faringe, eligiendo preferentemente las zonas infamadas y membranosas con movimientos semi circulares de derecha a izquierda.
Posteriormente se hace la descarga de la muestra en los agares proporcionados (sangre, Mck, SM), y luego en un porta objetos para efectuar una tinción de Gram de la muestra directa. La bacteria proporcionada se inocula solo en agar sangre y agar sal manitol y procederá igual que los otros agares. Estos son incubados en condiciones de anaerobiosis para un mejor crecimiento, durante 24hr a 37ºC. Transcurrido el tiempo de incubación se observa el crecimiento de cada agar y se inicia con las respectivas morfologías macro y microscópicas.
Según sea el crecimiento en los agares, se realizan las pruebas bioquímicas para confirmar la especie de la bacteria encontrada.
Luego de haber identificado a la colonia (G+, G-) se realizaran las pruebas bioquímicas correspondientes.
Agar sangre Agar Sal Manitol Agar MacConkey
Prueba de catalasa
Positiva negativa
-Prueba -hemolisis
Optoquina -antibiograma
-Prueba
Camp Medio Medio
amarillo rosa
S.aureus S. epidermidis
Antibiograma
Incubar 24Hr agar sangre
Catalasa Sensibilidad
Coagulasa Resistencia Inoculación en pruebas bioquímicas
- MIO
- LIA
- Citrato
- Malonato
- Urea
Leer sensibilidad resistencia.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se inoculó la muestra en agar Sangre, Sal Manitol y Mck. En el único agar donde se mostro crecimiento fue en el agar sangre. Los demás agares no mostraron indicio de crecimiento alguno. Por lo tanto al agar sangre se le realizó la microscopia y las características macroscópicas a este medio. Llevando a cabo estos dos procedimientos se determinó que existían dos tipos de microorganismos. En la siguiente tabla se puede visualizar los datos recolectados.
AGAR SANGRE
CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS
FORMA Cocos Bacilos
ARREGLO Parejas Aislados
AFINIDAD TINTORIAL G ( + ) G (+)
CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS
FORMA Redonda Redonda
BORDE Entero Entero
ELEVACIÓN Plana Aplanada
L.R. (-) (-)
L.T. (-) (-)
CONSISTENCIA Cremosa Mucoide
SUSTRATO α hemolítico ------------
CATALASA NEGATIVO CATALASA NEGATIVO
BILIS NEGATIVO UREASA NEGATIVO
OPTOQUINA NEGATIVO NITRATOS NEGATIVO
La prueba de optoquina fue negativa, no se vio ninguna inhibición, por esto se concluyó que el Estreptococo α-hemolítico, no era S. pneumoniae.
CONCLUSIÓN
Es muy importante efectuar adecuadamente la toma de muestra ya que se puede contaminar fácilmente, siendo de esta manera no se podría identificar exactamente la razón del problema.
Se debe tener en cuenta cual es la flora normal del exudado, en este caso faríngeo, para después dar hincapié a aquellas bacterias que son patógenas para el ser humano y con esto minimizar los errores para dar un diagnostico preciso.
Mediante las pruebas bioquímicas y la morfológica micro y macroscópica se pudo llegar a la conclusión de que el paciente contaba con Estreptococo no pneumoniae α hemolítico; también se encontraron algunos bacilos difteroides. Las pruebas bioquímicas catalasa, y optoquina fueron las pruebas diferenciales para poder identificar el tipo de microorganismo patógeno afectante.
BIBLIOGRAFÍA.
http://www.salud.gob.mx/indre/iras.htm 12 Octubre 2007 6:00pm
http://www.geocities.com/lorigardeweg/page26.html 12 Octubre 2007 6:00pm
http://epi.minsal.cl/epi/html/public/difteria.htm
4.- Jean Mac Faddin (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias.
Editorial Panamericana. México, D.F. Páginas 112,126,134 y 190.
Madigan Michael, Martinko John, Parker Jack, Brock Biología de los Microorganismos 10° Edición, PEARSON Prentice Hall. España Pág. 868-871